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Anwendung Von Echtzeit-Rt-PCR

Anwendung Von Echtzeit-Rt-PCR

Vijayalakshmi, N.

Paperback

Biology

ISBN10: 6203897159
ISBN13: 9786203897159
Publisher: Verlag Unser Wissen
Published: Apr 24 2025
Pages: 68
Weight: 0.23
Height: 0.16 Width: 6.00 Depth: 9.00
Language: German
Das Virus der Maul- und Klauenseuche (MKS) wird durch einen Virusisolationstest in Kombination mit einem Antigen-ELISA und neuerdings mit einer einstufigen RT-PCR diagnostiziert. Die fluorogene RT-PCR gewinnt immer mehr an Bedeutung für den schnellen Nachweis des MKS-Virus aus klinischen Proben, die nicht mit den üblichen Virusisolationstests und Antigen-ELISA bearbeitet werden können. Bei der quantitativen Echtzeit-RT-PCR (qRT-PCR) wird die Reverse Transkription mit der PCR-Amplifikation und dem Nachweis einer positiven Amplifikation mit fluoreszierenden Sonden wie der TaqMan (R)-Sonde kombiniert. In der vorliegenden Studie wurde eine auf TaqMan(R)-Sonden basierende qRT-PCR standardisiert und zum Nachweis des FMDV-Genoms aus klinischen Proben wie Nasensekret, Plasma und Ösophagus-Rachen-Flüssigkeiten (Probang-Proben) verwendet. Die anfängliche Standardisierung erfolgte mit verschiedenen seriellen Verdünnungen eines FMDV-Isolats OTNN 24/84 (106,8 TCID50) und 102 Viren konnten mit der TaqMan(R) qRT-PCR identifiziert werden. Die RNA-Standards wurden in vitro aus einem Plasmid synthetisiert, das 110 Basenpaare der 3D-Region eines FMDV-Isolats vom Typ O enthält. Eine zehnfache serielle Verdünnung der RNA wurde hergestellt und als Standard-RNA zur Erstellung von Standardkurven verwendet.

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